محیط کشت لبنیات ✅ + معرفی و مشاوره راه اندازی خطوط لبنیاتی

تهیه محیط کشت لبنیات با آماده سازی آب پیتونه بافره

ترکیب: پپتون ۱۰ گرم، کلرید سدیم ۵ گرم، سدیم هیدروژن ارتوفسفات ۹ گرم، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1./5 گرم، آب مقطر ۱۰۰۰ میلی لیتر. این محیط کشت لبنیات به صورت تجارتی موجود است.

آماده سازی: محیط کشت لبنیات را براساس دستورالعمل سازنده تهیه کرده و به میزان ۲۲۵ میلی لیتر در ارلن مایر ۱۰۰۰ میلی لیتری تقسیم کرده در اتوکلاو با دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه سترون کنید. pH نهایی محیط کشت باید 7 باشد.

محلول برلیانت گرین و آب: ۲۲۵ میلی لیتر آب مقطر سترون را با یک میلی لیتر برلیانت گرین نیم درصد مخلوط کنید.

👇 برای خرید دستگاه های لبنیاتی با گروه هیمورا تماس بگیرید. 👇

محيط غنی کننده انتخابی

الف) محیط تتراتيونات

ترکیب محیط پایه: عصاره گوشت ۵ گرم، پپتون ۱۰ گرم، کلرید سدیم ۳ گرم، کربنات کلسیم 45 گرم، آب مقطر ۱۰۰۰ میلی لیتر.
این محیط کشت لبنیات باید در اتوکلاو ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه سترون شود. pH نهایی باید 7 باشد.

بررسی محلول های محیط کشت لبنیات تتراتیونات

محلول سدیم تیوسولفات

5 گرم سدیم تیوسولفات با ۵ مولکول آب را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کرده و در اتوکلاو با دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد سترون کنید.

محلول ید

برای تهیه محیط کشت لبنیات با این محلول، 20 گرم ید و ۲۵ گرم یدید پتاسیم را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کرده و محلول را در ظرف تیره با دربندی محکم نگهداری کنید.

محلول برلیانت گرین

0/5 گرم برلیانت گرین را به ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر اضافه کنید و محلول را حداقل یک روز در جای تاریک نگهداری کنید، تا برای تهیه محیط کشت لبنیات خود به خود سترون شود.

محلول صفراوی گاو

۱۰ گرم صفرای خشک شده گاو را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر از راه جوشانیدن حل کنید و آن را در اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه سترون کنید.

👆 معرفی تجهیزات شیردوشی گروه صنعتی هیمورا 👆

ترکیب محیط کامل تتراتيونات

محیط پایه                                    900 میلی لیتر
محلول سدیم تیوسولفات                100 میلی لیتر
محلول يد                                     20 میلی لیتر
محلول برلیانت گرین                        2 میلی لیتر
محلول صفرای گاو                          50 میلی لیتر

مخلوط کردن ترکیبات مذکور باید در شرایط سترونی و جزء به جزء انجام شود. محیط آماده را در حجم های ۲۲۵ میلی لیتری برای شیر و ۱۰۰ میلی لیتری برای سایر فراورده ها، در ارلن های ۵۰۰ و ۲۵۰ میلی لیتری سترون شده توزیع کنید. این محیط کشت لبنیات حداکثر تا یک هفته در دمای 5 درجه سانتیگراد و در محل تاریک قابل نگهداری است.

ب) دومین محیط کشت لبنیات غنی کننده انتخابی یا سلنیت سیستین دار

ترکیب تریپتون ۵ گرم لاکتوز ٤ گرم دی سدیم هیدروژن ارتوفسفات، ۱۰ گرم سدیم هیدروژن، سلینت ٤ گرم، ال سیستین 1 گرم، آب مقطر ۱۰۰۰ میلی لیتر.
آماده سازی این محیط کشت لبنیات بصورت تجارتی موجود است. آن را براساس دستورالعمل سازنده تهیه کنید و در ارلن مایر ۵۰۰ و ۲۵۰ میلی لیتری سترون شده و در شرایط سترونی در حجم های ۲۲۵ میلی لیتری برای شیر و ۱۰۰ میلی لیتری برای سایر محصولات شیر تقسیم کنید. این محیط نباید اتوکلاو شود و باید در روز مصرف تهیه گردد.

با استفاده از جدول مرحله پیش غنی سازی مقدار لازم از نمونه را به محیط کشت لبنیات مناسب انتقال داده و نمونه ها را در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ١٦ تا ۲۰ ساعت گرمخانه گذاری کنید. با استفاده از یک پیپت ۱۰ میلی لیتری سترون، ۱۰ میلی لیتر از کشت مذکور را به ۱۰۰ میلی لیتر محیط کشت تتراتیونات و ۱۰ میلی لیتر دیگر را به محیط کشت سلنیت سیستین تلقیح کرده و مدت ١٨ تا ٢٤ ساعت در دمای مناسب در مورد سلینت ۳۷ درجه سانتیگراد و برای تتراتيونات ٤٣ درجه سانتیگراد گرمخانه گذاری کنید.

در مورد جست وجوی سالمونلا در شیر مایع، مرحله پیش غنی سازی نیاز نبوده و از ابتدا باید ۲۵ میلی لیتر از نمونه به هر یک از محیط های کشت غنی کننده انتخابی تلقیح شود. زمان و دمای گرمخانه گذاری این محیط کشت لبنیات بر اساس روش فوق است.

کشت روی محيط جامد تشخيص

1- محیط کشت لبنیات برلیانت گرین فنل رد آگار (اولین محیط تشخیصی)

ترکیبات: عصاره گوشت ۵ گرم، پپتون ۱۰ گرم، عصاره مخمر ۳ گرم، دی سدیم هیدروژن ارتوفسفات ۱ گرم، سدیم دی هیدروژن ارتوفسفات 6 گرم، آگار ۱۸-۱۲ گرم، آب مقطر ۹۰۰ میلی لیتر.

مواد مذکور را از طریق جوشانیدن در آب حل کنید. محیط کشت لبنیات پایه را به ارلن های ۵۰۰ میلی لیتری منتقل کرده و در اتوکلاو در دمای ۱۲۱ درجه سانتیگراد به مدت ۱۵ دقیقه سترون کنید. pH نهایی باید 7 باشد.

محلول قند و فنل رد

لاکتوز ۱۰ گرم، ساکاروز ۱۰ گرم، فنل رد 0/09 گرم.

مواد فوق را در ۱۰۰ میلی لیتر آب مقطر حل کرده و با استفاده از حمام آب ۷۰ درجه سانتیگراد به مدت ۲۰ دقیقه حرارت دهید و سپس آن را تا ۵۵ درجه سانتیگراد سرد کنید.

محیط کامل

محیط کشت لبنیات پایه ۹۰۰ میلی لیتر، محلول قند و فنل رد ۱۰۰ میلی لیتر، محلول برلیانت گرین 0/5 درصد یک میلی لیتر.
در شرایط سترونی محیط پایه و محلول قند و فنل رد را در دمای ۵۵ درجه سانتیگراد مخلوط و در پلیت های سترون به میزان ۱۵ میلی لیتر تقسیم کرده و صبر کنید تا خنک شود. پلیت آماده نباید بیش از ٤ ساعت در دمای اطاق یا ٢٤ ساعت در دمای صفر تا ۵ درجه سانتیگراد نگهداری شود.

2- بیسموت سولفیت آگار (دومین محیط تشخیصی)

ترکیبات: پپتون ۱۰ گرم، عصاره گوشت ۵ گرم، گلوکز ۵ گرم، دی سدیم هیدورژن ارتوفسفات 4 گرم، سولفات آهن 0/3 گرم، آمونیوم بیسموت نیترات 1/85 گرم، سدیم سولفیت 6/15 گرم، آگار ۲۰ گرم، برلیانت گرین 0/025 گرم، آب مقطر ۱۰۰۰ میلی لیتر. ترکیبات مذکور را به مدت یک دقیقه بجوشانید. pH نهایی را در 0/1 تنظیم کرده و محیط کشت لبنیات آماده شده را در دمای ٤٥ تا ٥٠ درجـه بـه میزان ۲۰ میلی لیتر در پلیت سترون تقسیم کنید. این محیط را پس از آماده سازی مصرف نمائید.

روش کشت و شناسایی

یک حلقه کامل از کشت هر یک از محیطهای کشت غنی کننده انتخابی برداشته و روی سطح محیط کشت لبنیات برلیانت گرین – فنل ردآگار و بیسموت سولفیت آگار پخش کرده و برای مدت ٤٠ تا ٤٨ ساعت در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد گرمخانه گذاری کنید. سپس ظروف پتری را از نظر وجود پرگنه سالمونلا بررسی کنید. پرگنه های سالمونلا در محیط برلیانت گرین فنل رد آگار صورتی رنگ و روی محیط بیسموت سولفیت آگار قهوه ای، سیاه و با جلای فلزی است. بعضی از گونه های سالمونلا پرگنه سبز ایجاد می کند. پرگنه های ظاهر شده با مشخصات مذکور سالمونلا فرض می شود. آزمایش های تأییدی تشخیص سالمونلا باید به وسیلۀ کارشناسان با تجربه و در مراکز ذی صلاح انجام شود.

👆 معرفی دستگاه پخت شیر گروه صنعتی هیمورا 👆