آزمایش میکروبی بستنی – راهنمای کامل و اصولی✅- هیمورا

شمارش کلی میکروبی استاندارد برای آزمایش میکروبی بستنی

آماده سازی نمونه

برای پرهیز از مشکلات برداشت نمونه ای در آزمایش میکروبی بستنی که نماینده واقعی کل محصول مورد آزمایش باشد، تنها میتوان از فراورده ذوب شده نمونه برداشت. به این منظور میتوان بستنی منجمد را در دمای اتاق قرار داد و یا آن را در حمام آب با دمای ٤٥ درجه سانتیگراد به مدت حداکثر ۱۵ دقیقه قرار داد تا ذوب شود و بعد از این که بستنی ذوب و به طور کامل مخلوط شد، نمونه را برداشت.

اندازه گیری نمونه مورد آزمایش

نظر به این که افزایش حجم در نمونه های مختلف بستنی گوناگون بوده و بستنی های مختلف وزن مخصوص های گوناگونی دارند، بنابراین برای دقت بیشتر استفاده از اندازه گیری وزنی در آزمایش میکروبی بستنی مطلوب تر از اندازه گیری حجمی است. با استفاده از یک پیپت سترون ۱۱ گرم از نمونه را به کمک ترازوی حساس به طور سترون مستقیم به داخل بطری های رقیق کننده که حاوی ۹۹ میلی لیتر از آب مقطر بافری شده است، انتقال دهید.

روش آزمایش

همانند روش شمارش کلی میکروبی استاندارد برای شیر است (شمارش میکروارگانیسم های مزوفیل هوازی)

یادآوری: در مواردی که همواره در محیط کشت تعداد کمی پرگنه رشد می کنند، بهتر است گاهی به طور تصادفی چند پلیت را به جای گرمخانه گذاری در ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۷ روز در دمای ۷ – ۵ درجه سانتیگراد گرمخانه گذاری کنید تا در آزمایش میکروبی بستنی وجود میکروارگانیسم های سرمادوست مشخص شود.

تعیین و شمارش کلیفرم ها

حضور کلیفرم ها در فراورده های منجمد شیر اغلب نشان دهنده شرایط نامناسب تولید و آلودگی بعدی توسط دستگاه ها و تجهیزات، وجود حشرات و مگس، دستکاری نامناسب توسط کارکنان و یا مواد افزودنی آلوده به بستنی بعد از پاستوریزاسیون آن و یا حمل و نقل و دستکاری غیر بهداشتی و غیره است. آزمایش میکروبی بستنی وجود این کلیفرم ها را تشخیص می دهد.

شمارش کلیفرم ها میتواند به هر دو روش استفاده از محیط مایع و یا محیط جامد انجام شود. بیشتر کارشناسان استفاده از محیط جامد را به دلیل کارایی بالاتر آن ترجیح میدهند. همچنین در محیط جامد میتوان هرگونه پرگنه مشکوک را آزمایش کرده و فوری تشخیص داد. در خصوص فراورده های منجمد که قندهای قابل تخمیر دیگری به جز لاکتوز دارند، نتایج مثبت کلیفرم ها باید از جواب مثبت کاذبی که توسط تخمیر غیر لاکتوزی باکتری های غیر کلیفرمی ایجاد میشود، تفریق و تایید شود.

👆 معرفی دستگاه هموژنایزر شیر گروه صنعتی هیمورا 👆

مواد و وسایل لازم

مواد و وسایل موردنیاز برای آزمون میکروبی بستنی همانند شیر است. علاوه بر آن تجهیزات زیر نیز لازم است:

• ترازوی حساس تا حد ۳۰ میلی گرم
• قاشقک سترون از جنس فولاد زنگ نزن با طول مناسب

آماده سازی و برداشت نمونه برای آزمایش
روش آماده سازی و برداشت نمونه
مانند آنچه در خصوص شمارش پلیت استاندارد ذکر شد، عمل می شود.

روش آزمایش

1- آزمون کلیفرم در محیط جامد

حجمی معادل یک میلی لیتر از رقت مناسب نمونه را به داخل یک پلیت سترون منتقل کنید. مقدار ۱۰ تا ۱۵ میلی لیتر از محیط VRBA و یا آگار دزاکسی کولات را به پلیت مذکور اضافه کنید. این روش آزمایش میکروبی بستنی همانند جست وجو و شمارش کلیفرم ها در مبحث شیر پاستوریزه است.

2- شمارش آنتروباکتریاسه

نمونه را براساس آنچه در مورد آماده سازی نمونه آزمایش میکروبی بستنی در بالا گفته شد، آماده کنید. بطور معمول در فراورده هایی که در ترکیب آنها شکر یا مواد شیرین کننده استفاده شده، آنتروباکتریاسه جست وجو و شمارش می شود.

روش آزمون

روش کار براساس روش آزمایش کلی فرمها در شیر پاستوریزه است، با این تفاوت که بایـد بـه محیط کشت VRBA قبل از تهیه و به صورت خشک مقدار یک درصد گلوکز اضافه شود. در این روش دمای گرمخانه گذاری 35 درجه سانتیگراد و زمان ۲۴ ساعت است.

3- جست و جوی اشریشیاکلی

نمونه آماده شده برای آزمون میکروبی بستنی را بر اساس آنچه در مبحث خامه آمده، آزمایش کنید. با این تفاوت که از محیط کشت سبز درخشان دوبار قدرت و مقدار ۱۰ میلی لیتر نمونه (که حاوی ۱ گرم نمونه است)، استفاده میشود.

آزمون فسفاتاز

برای برداشت نمونه ی از مخلوط بستنی قبل از اضافه کردن مواد طعم دهنده و رنگ دهنده و میوه و گردو و … استفاده کنید. چنانچه از بستنی کامل برای آزمایش میکروبی بستنی استفاده میکنید، قبل از آزمایش تمامی میوه ها و خرده های گردو و …. را از آن خارج کنید. برای هر نمونه یک شاهد اضافی در نظر بگیرید، تا بتوانید رنگ ایجاد شده به وسیله مواد عطر و طعم دهنده را ارزیابی کنید. آزمایش را مانند روش ذکر شده در مورد شیر انجام داده و نتایج را نیز همانند آن بیان و تفسیر کنید.

👇 برای خرید دستگاه های لبنیاتی با گروه هیمورا تماس بگیرید. 👇

توجه ویژه برای آزمایش میکروبی بستنی

یک مورد دیگر در آزمایش میکروبی بستنی که نتیجه مثبت کاذب را نشان میدهد، افزودن مواد طعم دهنده و به ویژه وانیل به مخلوط بستنی است که ممکن است قبل یا بعد از پاستوریزاسیون اضافه شده باشد. وقتی وانیل به مخلوط بستنی اضافه میشود (چه زمانی که بخشی از مخلوط پاستوریزه شده و چه زمانی که مخلوط کامل پاستوریزه شده است) رنگ آبی در آزمایش فسفاتاز مشاهده میشود که یک نتیجه مثبت کاذب است. همینطور وقتی وانیل به مخلوط بستنی که از قبل دمای ۸۲ درجه سانتیگراد دیده است، اضافه شده و مخلوط دوباره پاستوریزه میشود، تست فسفاتاز آن منفی خواهد بود. مشاهده این اختلاف در آزمایش میکروبی بستنی مربوط به فعالیت باقیمانده آنزیم بر وانیل است و بستگی به مدت زمان تاثیر آنزیم و مقدار و ماهیت مخلوط و آزاد شدن فنل از آن دارد.
بدیهی است که در آزمایش میکروبی بستنی شدت رنگ آبی وقتی که وانیل قبل از پاستوریزاسیون به مخلوط بستنی اضافه شود، بیشتر خواهد بود و ممکن است با طولانی شدن فاصله زمانی بین افزودن وانیل و انجام آزمایش، زیادتر نیز شود.

علت اضافه کردن وانیل قبل از پاستوریزاسیون

به دلایل ذکر شده آزمایش نمونه ای که وانیل بعد از پاستوریزاسیون و قبل از انجام آزمون بــه آن اضافه شده ممکن است نتیجه آزمایش را به طور کاذب مثبت نشان دهد که اگر با نمونه بدون وانیل که به صورت ناقص پاستوریزه شده مقایسه شود، موجب بالا رفتن ضریب خطا و ایجاد جواب منفی کاذب در مورد محصول اخیر میشود. پس وجود وانیل در مخلوط بستنی که شیر آن از قبل حرارت ۸۰ درجه سانتیگراد ندیده، در آزمون میکروبی بستنی می تواند سبب ایجاد جواب مثبت کاذب در تفسیر نتایج شود.

بنابراین به دلایل مذکور ضروری است که تمام نمونه هایی که مثبت اند با نمونه شاهد مقایسه شوند (نمونه شاهد در آزمایشگاه پاستوریزه شده و به عنوان کنترل در نظر گرفته می شود و یا در لوله های آزمایش به جای محلولهای اضافه شده در آزمایش فسفاتاز از آب بافر استفاده می شود و به عنوان کنترل در نظر گرفته میشود. چنانچه در آزمایش میکروبی بستنی رنگ آبی ایجاد شده در لوله کنترل و لوله مربوط به نمونه، به یک میزان آبی رنگ شوند، نمونه به طور کامل پاستوریزه شده و چنانچه رنگ آبی ایجاد شده در لوله مربوط به نمونه پر رنگ تر از لوله کنترل باشد، دال بر پاستوریزاسیون ناقص خواهد بود).

👆 معرفی دستگاه نگهداری مایه بستنی گروه صنعتی هیمورا 👆